|
| 產地 | 進口、國產 |
| 品牌 | 帛科 |
| 貨號 | BK-P64637 |
| 用途 | 公司產品僅用于科研 |
| 包裝規格 | 50次 |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 是否進口 | 是 |
本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
|
產品名稱 |
規格 |
貨號 |
|
禽正呼腸孤病毒RT-PCR試劑盒 |
50次 |
BK-P64637 |
實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液
濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預培養按照樣品的采集與預培養按照菌檢驗要求進行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
中國倉鼠卵巢細胞系;CHO-TGF-beta-3/2000 Carrying Psv2-beta-TGF 肥大細胞瘤細胞，P815細胞 INS-1細胞，大鼠胰島素細胞去甲基雷諾嗪Desmethyl Ranolazine質量規格：美國進口
293來源病毒包裝細胞;ΦA-GP雷諾嗪-d3Ranolazine-d3質量規格：美國進口
STIM1 Others Human STIM1 / GOK 細胞裂解液 (陽性對照) 雷諾嗪Ranolazine質量規格：美國進口
神經元細胞Many types of cells包裝：5 ×105方(1ml)去甲基雷諾嗪β-D-葡萄糖苷酸Desmethyl Ranolazine β-D-Glucuronide質量規格：美國進口
EPHB1 Others Human EPHB1 / EPHT2 細胞裂解液 (陽性對照) (R)-鹽酸樂卡地平(R)-Lercanidipine 質量規格：美國進口
海馬神經元細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)正十六烷(Standard
for GC,>99.5%(GC))Hexadecane質量規格：Standard for
GC,>99.5%(GC)
PTN Others Mouse 小鼠 Pleioophin / PTN / HB-GAM 細胞裂解液 (陽性對照) 正十六烷(分析標準品,≥99.5%(GC))Hexadecane質量規格：分析標準品,≥99.5%(GC)
大鼠內皮細胞完全培養基 100mL2-萘磺酸鈉(>98%,BR)-2-naphthalenesolfonate質量規格：>98%,BR
RBL-2H3大鼠嗜堿性細胞細胞 RBL-2H3 rat neuophils alkaline cell leukemia MEM培養基(GIBCO)+15%熱滅活FBS司班20Span* 20質量規格：BR
IFNA2 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IFNA2 / Ierferon alpha 2 蛋白 (His 標簽)全染色劑(>95%,BS)Stains-All質量規格：>95%,BS
上皮細胞生長添加物MEpiCGS羥基脲Hydroxyurea/Hydroxycarbamide質量規格：>99%,BR
MAP2K6 Others Human MKK6 / MEK6 / MAP2K6 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 羥基脲（標準品）Hydroxyurea/Hydroxycarbamide質量規格：HPLC>98%,標準品
Butt瘤細胞;RAJI枸櫞酸托瑞米芬Toremifene 質量規格：>99%,BR,可用于細胞培養
MFC細胞，細胞 綠色熒光蛋白標記細胞,MGC803-GFP細胞 恒河猴胚腎細胞;FRhK-4 [FRhK4]枸櫞酸托瑞米芬Toremifene 質量規格：>99%,BR,可用于細胞培養
大鼠細胞;GH3枸櫞酸托瑞米芬（標準品）Toremifene 質量規格：HPLC>98%,標準品
恒河猴皮膚細胞;RM-S1 細胞，LoVo細胞 TE-1(細胞)3,5-二甲氧基芐溴(>96.0%(GC))3,5-Dimethoxybenzyl Bromide質量規格：>96.0%(GC)
癌細胞;MCF 7B3,5-二溴-1-三甲基硅基苯(>97.0%(GC))3,5-Dibromo-1-trimethylsilylbenzene質量規格：>97.0%(GC)
CD200R4 Others Mouse 小鼠 CD200R4 / CD200 Receptor 4 / CD200RLa 細胞裂解液 (陽性對照) 3,5-二水楊酸鋰(>98%，BC)Lithium 3,5-diiodosalicylate質量規格：>98%，BC
恒河猴腎細胞;RM-1無水溴化鋰(>98%,BR)Lithium bromide質量規格：>98%,BR
AMPK Others Human AMPK (G1/B2/A1) Heteroimer 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 偏1酸鋰(>98%,BR)Lithium metaphosphate質量規格：>98%,BR
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative
real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
禽正呼腸孤病毒RT-PCR試劑盒主要服務：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR
